트리스 토대 77-86-1 생물학적 버퍼 트로메탐올

트리스 베이스 77-86-1 생물학적 버퍼 트로메타몰

단백질 전소분석 및 웨스턴 블팅에서 트리스 버퍼의 사용

트리스 버퍼는 단백질 전소분석과 웨스턴 블팅에 필수적입니다. 대부분의 SDS-PAGE 젤, 실행 버퍼 및 블팅 버퍼는 트리스로 버퍼됩니다.모든 일반적인 버퍼는 미리 혼합되어 있습니다., 또는, 당신이 당신의 자신의 Tris 버퍼를 만드는 것을 선호한다면, 당신은 정제된 Tris 파우더, 글리신, 그리고 다른 분자 생물학 수준의 버퍼 반응기로 시작할 수 있습니다.

대부분의 SDS 젤은 불연속 Tris 버퍼 시스템을 사용합니다. 더 큰 펩타이드가 쉽게 이동 할 수 있도록 큰 구멍이있는 스택 젤은 일반적으로 pH 6.7 ∼ 6에서 구성됩니다.8이 pH에서, 이온화된 염화 이온은 빠르게 이동하여, 그 뒤에 있는 pH를 높이고 낮은 전도성 영역을 가진 전압 경사도를 생성합니다.그 때문에 글리신은 (운동 버퍼에서) 이온화되고 염화 전선 뒤에 이동합니다.결합 된 SDS로 인해 음 전하를 가진 샘플의 대부분의 펩타이드는 염화물과 글리신 사이에 이동하여 좁은 밴드를 형성하고 따라서 "더하기"됩니다.

스택이 더 높은 pH (보통 pH 8.7~8.8) 에 있는 해소 젤에 도달하면 글리신 이온화가 증가하여 펩타이드를 가속화하고 추월하게 된다.분해 젤의 작은 포스 크기는 시팅 효과를 갖기 시작합니다., 그 결과 크기에 따라 펩타이드가 분리됩니다.

대부분의 서양의 블러팅 프로토콜은 단백질 전송을 위해 낮은 이온 강도의 Tris 버퍼를 사용합니다. 전송 시간은 블러팅 장치의 종류와 관심있는 펩타이드 크기 범위에 달려 있습니다.

핵산 아가로스 전자기술에서 트리스 버퍼의 사용

트리스 버퍼는 DNA 아가로스 전자기술에 널리 사용된다. 두 가지 주요 버퍼는 TBE (트리스 보라트/EDTA) 와 TAE (트리스 아세테트/EDTA) 이다.서로 다른 형태의 DNA의 해상도와 전기분해 과정에서 이동성에 약간의 차이가 있지만이 Tris 버퍼들은 일반적으로 상호 교환적으로 사용될 수 있습니다. TBE의 보레이트 이온은 많은 효소를 억제합니다.일부 효소 매개 하류 조작은 작동하지 않을 수 있습니다.따라서 TAE 버퍼는 대부분의 DNA 실험실에서 일상 사용에 선호됩니다.

트리스 버퍼 를 만드는 것

트리스 버퍼는 25°C에서 pKa가 약 8.1이기 때문에 대부분의 생물 시스템에 좋은 선택이며, pH 7~9 범위에서 효과적인 버퍼입니다.이 pH 범위는 대부분의 생물학적 과정에 적합합니다.트리스 파우더는 또한 HEPES와 같은 더 전문적인 버퍼보다 저렴하고 견고합니다.

트리스 버퍼 용액을 만드는 두 가지 방법이 있습니다. 하나는 트리스 베이스와 트리스 HCl의 용액을 만드는 것입니다.그리고 그 다음 한 용액 (일반적으로 Tris HCl) 의 알리쿼트를 다른 용액 (일반적으로 Tris 염기) 에 첨가하고 올바른 pH가 얻을 때까지 pH를 모니터링합니다.실제로는 이런 일이 거의 일어나지 않습니다.

일반적으로 사용되는 트리스 버퍼의 대부분을 만드는 일반적인 방법은 트리스 염기만 사용하는 것입니다. 적절한 양의 트리스 분말은 물에 녹이고, pH는 HCl로 조정됩니다.그리고 나서 버퍼는 원하는 부피로 만들어집니다pH를 조정하는 동안 초과가 없다고 가정하면 이 방법은 이온 강도를 변경하지 않습니다. 그러나 NaOH로 초과 및 재조정 후,또는 Tris HCl를 사용하여 pH를 NaOH로 조절합니다., 이온 강도가 변합니다. Tris 버퍼의 의도 된 사용에 따라 그러한 변화는 중요하지 않을 수도 있습니다.

트리스 버퍼를 만들 때 pH를 조절할 때 트리스 호환 전극을 사용하는 것이 중요합니다.단일 결합 Ag/AgCl 전극은 은이 점차 전극을 침착시키고 막아주기 때문에 Tris 버퍼와 함께 사용할 때 불안정을 나타낼 수 있습니다.이중 융합 또는 칼로멜 참조 전극의 사용은 Tris 버퍼의 정확한 pH 측정을 보장합니다.