생화학 및 분자 생물학 분야에서, HEPES 버퍼 (4- ((2-하이드록시 에틸)-1-피파라지네티테네섬유산) 은 세포 배양, 단백질 연구,생화학적 진단 키트 및 다른 시나리오의 좋은 버퍼 능력으로 인해, 세포에 대한 독성이 없으며 좋은 생물 호환성입니다. HEPES 버퍼의 품질을 보장하는 것은 관련 과학 연구 실험의 정확성과 생물학적 제품의 안정성에 중요합니다..이 모든 것은 합성에서 정화까지의 생산 과정에서 엄격한 품질 통제로 시작됩니다.
1HEPES 버퍼의 합성 과정과 품질 상관관계
원료로 하이드록시 에틸 피페라진과 나트륨 클로로 에탄 수소나트와 합성: 이 방법에서는하이드록시에틸피페라진과 나트륨 클로로에탄수플포네이트가 적절한 반응 조건에서 대체 반응에 의해이 과정에서는 반응 온도, 반응 시간 및 원료의 분자 비율이 반응 과정과 제품 순도에 영향을 미치는 주요 요소입니다. 온도가 너무 높으면,부작용을 유발할 수 있습니다., 불순물을 생성하고 HEPES의 순도를 감소시킵니다. 반응 시간이 너무 짧으면 반응이 불완전하고 양이 감소합니다.
나트륨 이세티오나트와 에틸피페라진의 합성 경로: 이 합성 경로는 여러 단계가 포함됩니다. 첫째, 나트륨 이세티오나트는 특정 조건 하에서 활성화되어야 합니다.그리고 에틸피페라진으로 응고활성화 단계에서 활성제의 선택과 복용량은 나트륨 이세티오나트의 활동에 영향을 미치며 그 후 후속 응고 반응의 효과에 영향을 미칩니다.응축 반응 중에, 반응 시스템의 pH는 반응 속도와 제품 구조에 중요한 역할을 합니다.반응 시스템의 pH 값을 적절한 pH 범위 내에서 안정시키기 위해 산-기저 조절기가 필요합니다..
2- 정화 과정의 HEPES 버퍼 품질에 대한 영향
1결정화 방법: 결정화는 다른 용매와 다른 온도에서 HEPES의 용해성의 차이를 사용하여 수행됩니다.합성된 원료는 적절한 용매에 용해됩니다, 그리고 HEPES는 천천히 냉각 또는 용매의 증발에 의해 점차 결정화되고 침착되며, 불순물은 모액에 남아 있습니다. 그러나,이 방법은 온도 조절에 매우 높은 요구 사항을 가지고 있습니다.너무 빠른 온도 변화는 불규칙한 결정화 속도를 초래하여 결정의 순수성과 입자 형태에 영향을 줄 수 있습니다.
2이온 교환 염색체: 이온 교환 합성에 있는 HEPES와 불순물의 다른 흡수 및 흡수 능력에 기초하여 분리가 이루어집니다.HEPES와 불순물을 포함하는 혼합 용액이 이온 교환 樹脂 기둥을 통과하면, HEPES 및 불순물은 합성에 있는 이온과 서로 다른 정도에서 교환하고 흡수됩니다. 적절한 엘루엔트와 엘루엔트 조건을 선택함으로써,HEPES는 정화 목적을 달성하기 위해 선택적으로 헐 수 있습니다.그러나 이 방법은 유출물의 흐름 속도와 농도와 같은 매개 변수의 정확한 통제를 요구합니다. 그렇지 않으면 HEPES와 불순물의 분리이 완료되지 않을 수 있습니다.
3- 생산 중 품질 검사 및 모니터링
(I) 주요 품질 지표 검사
1순도 검사: 고성능 액체 염색체 (HPLC) 는 HEPES의 순도를 검출하는 일반적인 방법입니다. 샘플을 HPLC 시스템에 주입함으로써,HEPES와 불순물은 염색체 열에서 다른 유지 시간에 따라 분리됩니다., 그 다음 HEPES의 순도를 정확하게 계산하기 위해 탐지기가 각 구성 요소의 함량을 감지합니다.
2pH 검출: HEPES 버퍼의 pH 값은 버퍼 성능과 직접 관련이 있습니다.정밀 pH 미터를 사용하여 정해진 조건에서 HEPES 용액의 pH 값을 측정하여 표준 범위 내에 있는지 여부를 결정합니다.다른 용도로 사용되는 HEPES 제품에서는 pH 값 표준이 약간 다릅니다. 예를 들어,세포 배양에 사용되는 HEPES는 세포 성장 환경의 안정성을 보장하기 위해 특정 세포 배양에 적용되는 pH 범위 내에서 pH 값이 있어야 합니다..
3불순물 함유량 검출: 원자 흡수 분광 (AAS) 을 사용하십시오.인덕티브 커플 플라즈마 질량 분광 (ICP-MS) 및 다른 기술로 중금속 불순물 함량을 탐지합니다., 수은, 캐드미엄 등); 수 sulfate와 같은 anionic 불순물의 함량을 탐지하기 위해 turbidimetry 또는 이온 염색체를 사용합니다.불순물 함량을 엄격히 조절하면 불순물이 후속 실험이나 생산 과정을 방해하는 것을 막을 수 있습니다..
담당자: Maggie Ma
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